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热敏型鳕鱼UDG酶是来源于大西洋鳕鱼(Gadus morhua cod)，可催化含尿嘧啶的DNA链中的尿嘧啶(dU)碱基和脱氧核糖之间的N-糖苷键发生水解，从而释放游离尿嘧啶。Uracil-DNA Glycosylase (UDG)可以水解含有dU的单链或双链DNA，但不能水解RNA或含有dU的长度不超过6个碱基DNA寡聚体。

UDG主要应用于消除PCR扩增过程中带来的产物污染问题。其防止污染的原理为：在PCR反应中加入适量的dUTP，以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成含dU碱基的PCR扩增产物；后续进行PCR反应时，使用UDG酶选择性切割可能被污染而带入的之前PCR扩增产生的含有dU的单链或双链DNA，从而避免之前的PCR扩增产物可能的污染对于本次PCR扩增带来的负面影响。

本制品为热敏型，在50℃孵育10分钟可以迅速不可逆灭活。在PCR或RT-PCR反应前，PCR或RT-PCR体系中加入Heat-labile Cod UDG室温处理5min，即可充分消除可能的之前的含有dUTP的PCR扩增产物的污染。本制品不仅适用于PCR，也适用于qPCR、RT-PCR和qRT-PCR等体系。

百奥莱博的Heat-labile Cod UDG酶活性鉴定结果可参考图1。

图1.百奥莱博和N公司的Heat-labile Cod UDG催化酶解5μL含dU碱基的PCR扩增产物效果图。使用本制品或国外N公司的酶，在20μL体系，分别以5μL含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物和不同量的(0U,0.01U,0.02U,0.04U,0.2U) Heat-labile Cod UDG，在1×HL Cod UDG Buffer，37℃孵育1h，然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本制品与N公司相比，具有相当的酶活。

百奥莱博的Heat-labile Cod UDG经灭活处理后酶活鉴定结果可参考图2。

图2.百奥莱博和N公司的Heat-labile Cod UDG以及百奥莱博的E.coli UDG (YTB4034)经50℃10min处理后，催化酶解5μL含dU碱基的PCR扩增产物效果图。将不同量的E.coli UDG (0U,0.005U,0.01U,0.025U)和百奥莱博以及N公司不同量的Heat-labile Cod UDG (0U,0.02U,0.04U,0.2U)经50℃ 10min处理之后，在20μL体系，分别以5μL含dU碱基的PCR扩增1500bp PCR产物为底物，在1×HL Cod UDG Buffer，37℃孵育1h，然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，E.coli UDG 50℃处理10min之后酶活仅轻微下降，而百奥莱博和N公司的Heat-labile Cod UDG均完全灭活。


去除含尿嘧啶的单链或双链DNA；去除含dU的PCR产物气溶胶污染；DNA修复与突变检测；提高PCR产物的克隆效率；提高点诱变的效率；研究蛋白质-DNA相互作用。用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、one-step RT-PCR体系。


One unit is the amount of enzyme required to liberate 1nmol uracil from dU-containing DNA in one hour at 37℃.

组分	200U	1000U	5000U
Heat-labile Cod UDG(1U/μL)	200μL	1mL	5mL
10×HL Cod UDG Buffer	2mL	5mL	10mL

保存：-20℃，有效期1年。


50mM Tris-HCl (pH7.5),100mM NaCl,0.5mM EDTA,1mM DTT,0.1% Triton X-100,50% (v/v) glycerol。


大肠杆菌重组、表达和纯化而获得。


不含UDG酶活力之外的内切或外切脱氧核糖核酸酶、RNase和磷酸酶活性。


10×HL Cod UDG Buffer：
700mM Tris-HCl,100mM NaCl,10mM EDTA,1mg/mL BSA,pH8.0 at 25℃。


50℃加热10分钟可以使Heat-labile Cod UDG完全失活。

• Heat-labile Cod UDG酶在大多数PCR反应缓冲液中均具有活性，但对于自行使用的PCR或RT-PCR体系，首次使用时建议先测试一下是否和所使用的体系兼容。通常取含dUTP的PCR扩增产物，参考图1加入适量UDG，观察能否有效降解含dUTP的PCR扩增产物。
  
• Heat-labile Cod UDG长期储存请置于-80℃保存，常规使用请于-20℃保存。-80℃保存会结冻，尽量避免反复冻融。
  
• 如果需要将Heat-labile Cod UDG酶应用于One-Step RT-PCR或者One-Step qRT-PCR体系，需要选择耐热反转录酶，并需要将逆转录温度设置为50～55℃。

• 按照常规反应体系设置PCR或RT-PCR反应体系，同时加入Heat-labile Cod UDG至最终浓度为0.01U/μl，混匀。通常仅加入PCR或RT-PCR的buffer即可，无需加入UDG的buffer。
  
• 25℃孵育5min (去除可能的含dUTP的PCR扩增产物的污染)，随后进入PCR或RT-PCR程序。

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